Оценка токсичности пестицидов для фитосейидных клещей
Для определения чувствительности хищных клещей к пестицидам можно использовать методы, описанные выше для тетраниховых клещей. Однако часто, особенно в полевых условиях, собрать большое количество фитосейид для опыта довольно сложно. Опыт же с небольшим (20—30 особей на повторность) числом клещей должен отличаться высокой точностью. Последняя достигается равномерным покрытием обрабатываемой поверхности рабочей жидкостью (при погружении возможно образование затеков и неравномерное покрытие препаратом листьев), а также исключением потерь обработанных пестицидом высокоподвижных хищников. Решению этих задач способствует использование специального опрыскивателя (конструкции Н.В. Никитина) и универсального садка (конструкции А.З. Петрушова).
Опрыскиватель (рис. 36, Б, В) состоит из высокооборотного электродвигателя 8, на валу которого располагают распылитель 9 диаметром 15 мм. К корпусу электродвигателя крепят кронштейн 77 с резервуаром 10. Садки 13 помещают внутри съемного кожуха 12 в специальные гнезда, расположенные на равном расстоянии (R = 200 мм) от оси распылителя. Кожух устанавливают на таком расстоянии от распылителя, чтобы крупные капли, образующиеся в процессе распыления, ударялись о его стенки, а мелкие — равномерным веером оседали вниз на поверхность садков. Благодаря симметричности процесса распыления каждый садок находится в одинаковых условиях.
Норму расхода препарата определяют и регулируют количеством распыливаемой жидкости. Скорость подачи жидкости через отверстие (диаметр 1,5 мм) в резервуаре на распылитель — 1 мл/с. Наиболее доступный способ определения нормы расхода — улавливание оседающих капель воды в бюксы (садки) с машинным либо веретенным маслом или на кружки фильтровальной бумаги, которые затем взвешивают. Зная диаметр садков или кружков бумаги и их массу до и после опрыскивания, легко определить объем рабочей жидкости, попавшей на единицу поверхности. Как правило, для опрыскивания садков с клещами в одном варианте норма расхода рабочей жидкости составляет 0,025 мл на 100 см2.
Садок (см. рис. 33, Д) для определения чувствительности клещей к пестицидам представляет собой стаканчик высотой 30 мм и диаметром 50 мм (толщина стенок 10 мм). По верхнему краю стаканчика вытачивают канавку шириной 5 и глубиной 4 мм для водного раствора глицерина (1:1). В садок помещают круглый поролоновый «матрасик», обильно смоченный водой (он должен плотно входить в садок и быть ниже его верхнего края на 5—7 мм). На «матрасик» помещают высечку из листовой пластинки, диаметр которой должен точно совпадать с внутренним диаметром садка. На высечку кисточкой подсаживают 25-30 самок хищного клеща. Таким образом подготавливают три-пять садков и одновременно их опрыскивают. Как только жидкость подсохнет, садки просматривают под бинокуляром. Хищников, заползших на верхний край садка, возвращают на обработанную пестицидом высечку, а садок закрывают крышкой-кружком из оргстекла с отверстием (диаметр 8—10 мм), заклеенным мельничным газом. Смертность определяют через 24 ч после обработки.
Садок более сложной конструкции (см. рис. 36, А) состоит из корпуса 1 с наружной резьбой у основания, стаканчика 5, плотно вставляемого внутрь корпуса (до выступов), и прижимной гайки 7 с внутренней резьбой. На стаканчик с обильно смоченным поролоновым «матрасиком» кладут круглую высечку из листовой пластинки. Ее диаметр должен равняться внешнему диаметру стаканчика (36 мм). Затем стаканчик вставляют в корпус, прижимают пальцем к внутреннему выступу и фиксируют гайкой. В результате высечка оказывается плотно зажатой между краем стаканчика и выступом корпуса. Это полностью исключает миграцию клещей на нижнюю сторону пластинки или гибель их в одном мениске.
При вычислении CK50 используют графический метод пробит-анализа Миллера-Тейтнера. Для этого на оси абсцисс прямоугольной системы координат откладывают логарифмы концентраций препарата, а на оси ординат — шкалу условных единиц (пробитов). Далее строят график. По показателям таблицы 5 находят значения пробитов, соответствующие полученным для каждой концентрации (средний результат из четырех-пяти повторностей). При пересечении величины концентрации и ее эффективности, выраженной в пробитах, ставят точки и между точками проводят прямую линию. На ней находят точки, соответствующие пробиту 5 (50 %) и 6,65 (95 %), опускают из них перпендикуляр на ось абсцисс и по логарифмической шкале находят значения CK50 и CK95 (% д.в.).
Если число клещей в опыте достаточно велико (не менее 400 особей для каждой концентрации — варианта), вычислением ошибки CK50 можно пренебречь.
Стандартную ошибку (SСК50) определяют по формуле
где CK84 соответствует пробиту 6; CK16 — пробиту 4 (на проведенной линии); N — число клещей в опыте, которые на графике представлены в виде точек, расположенных между значениями пробитов 3,5 и 6,5; доверительные пределы для CK50 при N = 30 особей равны ± 2SСК50
Степень устойчивости (СУ) вычисляют по формуле
Для выявления устойчивости клещей к химическим средствам и определения ее уровня следует закладывать специальные опыты. С этой целью в лаборатории содержат контрольную популяцию клещей, никогда не соприкасающуюся с акарицидами. Например, если необходимо изучить развитие устойчивости клещей в полевых условиях в определенном районе или хозяйстве, контролем может служить исходный уровень их устойчивости к тому акарициду, который установлен в системе обработок. Полученное в дальнейшем значение CK50 сравнивают с первичным значением CK50. В зависимости от температуры, влажности, сезона и т. д. CK50 изменяется в два-четыре раза, что не играет существенной роли при оценке данных, полученных в полевых условиях, поскольку конкретная цель работы в этом случае - регистрация изменений первичного уровня устойчивости.
Если к началу работы исследуемую популяцию обрабатывали данным акарицидом не первый сезон, и существует подозрение, что наблюдается повышение уровня устойчивости, то в хозяйстве, где применяли иные акарициды, одновременно следует определить CK50 для другой популяции и сравнить эти две величины. Если этого сделать нельзя, то можно использовать усредненные значения CK50 наиболее типичных препаратов для клещей с нормальной чувствительностью и дозы для диагностики устойчивости, приведенные в таблице 6.
Дополнительным и очень ценным критерием наличия устойчивых особей в популяции служит обработка клещей так называемой диагностирующей или дискриминирующей дозой препарата, подобранной с таким расчетом, чтобы обеспечить 100%-ю гибель особей с нормальной чувствительностью. Подобная обработка позволит получить информацию о потенциальном возрастании устойчивости раньше изменения CK50 и определить процент содержания резистентных клещей в популяции. Обычно дозы не менее чем в два раза превышают верхний порог чувствительности эталонной популяции.
Наличие выживших особей, зарегистрированное при проверке с применением дозы препаратов, диагностирующей резистентность, считается опасным сигналом появления устойчивости.