Лабораторные методы исследования клещей

Из растительноядных клещей для лабораторного разведения наиболее удобен обыкновенный паутинный клещ, которого содержат на растениях фасоли кустовых сортов или сои. Предварительно замоченные и начавшие прорастать семена высевают в глиняные вазоны с почвой (20—30 шт. на вазон) на глубину 2—3 см. Затем вазоны помещают на стеллажи или в остекленные боксы с люминесцентным подсвечиванием. Через 12—16 сут растения можно использовать для разведения клещей.

Хищных клещей проще всего разводить на тех же растениях, что и паутинного. В этом случае их выпускают на заселенные паутинным клещом растения и по мере необходимости добавляют паутинного клеща либо пересаживают на новые растения с жертвой. Однако поскольку многие виды тетранихид и фитосейид не приспособлены к размножению на сое или фасоли, то используют следующие методы.

Метод «плавающих листьев». Его широко применяют при изучении биологии плодовой плоскотелки, бурого плодового, туркестанского паутинного, желтого сливового и боярышникового клещей. Метод позволяет проследить жизненный цикл клещей, он очень удобен для наблюдений под бинокуляром.

Клещей отсаживают на нижнюю (верхнюю) сторону срезанных листьев кормового растения, которые, в свою очередь, помещают в физиологический раствор, либо в воду, налитую в небольшие стеклянные сосуды вместимостью 30—40 см3, или, что менее удобно, в чашки Петри (рис. 32). Края листьев для большей устойчивости на поверхности воды иногда покрывают узкой (3—4 мм) полоской расплавленного парафина.

При работе с Bryobia redikorzevi или Panonycnus ulmi на лист следует положить кусочек коры либо веточки: они необходимы самкам для откладки «зимних» яиц. В противном случае самки в поисках мест для откладки уходят с листьев, попадают в физиологический раствор и погибают. Подсохшие листья заменяют новыми, а клещей пересаживают тонкой препаровальной иглой или мягкой кисточкой (обычно это делают один раз в 4—6 сут).

Можно также помещать листья на увлажненные диски фильтровальной бумаги, укладываемые в четыре-пять слоев в чашки Петри или на обильно смоченную водой гигроскопическую вату. В этом случае на край листа препаровальной иглой или медицинским шприцем наносят узкую полоску невысыхающего клея. Зона, ограниченная клеевым барьером, представляет собой садок для воспитания клещей.

Методы «срезанных веток». В данном случае берут облиственные ветки кормовых растений длиной 15—20 см. С них удаляют все листья, кроме одного в среднем ярусе, и все почки. Оставленный лист мягкой кисточкой под бинокуляром очищают от хищников и насекомых. Чтобы лист, используемый для содержания клещей, дольше сохранялся, нижний конец ветки подрезают под водой и расщепляют вдоль на глубину 1—2 см. Затем ее ставят в воду, налитую в колбу Эрленмейера вместимостью 100 см3. Горлышко затыкают ватой. Под колбу с веткой подстилают лист бумаги. Вокруг дна колбы или на ветку (выше и ниже места прикрепления черешка) наносят слой невысыхающего клея, чтобы предупредить потерю клещей и заползание посторонних насекомых.

Содержание в садках. Недостаток методов, описанных выше, — возможность утраты клещей в процессе наблюдений из-за их высокой подвижности. Поэтому многие исследователи при работе с различными субстратами и видами клещей пользуются закрытым садком Уберталли и его модификациями.

Садок для наблюдения за развитием клещей состоит из трех пластинок органического стекла длиной 10 см, шириной 5 и толщиной 0,3—0,4 см, фильтровальной бумаги и трех стягивающих резиновых колец. На нижнюю пластинку (основание) укладывают слой фильтровальной бумаги толщиной 2,5 см и помещают на него лист растения. Сверху лист прижимают второй пластинкой с круглым отверстием в центре. Через это отверстие, находящееся как раз над листом растения, и наблюдают за развитием клещей. Третья пластинка служит крышкой. Собранный садок скрепляют резиновыми кольцами. При регулярном увлажнении фильтровальной бумаги лист сохраняет свежесть в течение трехчетырех недель.

Для предотвращения образования конденсата и вентиляции садка в верхней пластинке просверливают отверстие диаметром 0,5 см и заклеивают его мельничным газом. Отверстия можно сделать и в боковых стенках садка. В этом случае толщина центральной пластинки должна составлять 1 см, а отверстия надо с внутренней стороны заклеить мельничным газом.

Содержание клещей в садках открытого типа (рис. 33, Г, Д), где изолятором служит вода, полоска гусеничного клея, канавка с репеллентом или мокрая вата, осложняется тем, что значительная часть клещей в процессе опыта неизбежно погибает, увязнув в клее или утонув в воде.

Д.С. Яо и Д.А. Чант решили эту проблему, использовав в качестве барьера горячую проволоку диаметром 0,5 мм. Постоянная температура проволоки (54 °С) поддерживается низковольтным напряжением. Проволочный круг крепят к кольцу из термостойкого пластика и вставляют в верхнюю часть медной трубки диаметром 5 см. Нижнюю часть трубки опускают в проточную воду, а в верхнюю (ниже кольца из термостойкого пластика) кладут смоченный водой поролон или вату, на которые помещают «плотик» из листа фасоли или глянцевую бумагу (рис. 34). На поверхность иглой предварительно наносят бороздки, чтобы клещи имели доступную влагу. Таким образом, медная трубка поддерживает садок с клещами и одновременно отводит избыточную теплоту, возникающую при нагревании проволоки.

Для разведения хищных клещей также удобен садок Дж.А. Мак-Муртри и Г.Т. Скривена, используемый в различных модификациях. В металлический или пластмассовый противень помещают поролоновый матрасик, обильно пропитанный водой. На матрасик кладут площадку из водонепроницаемого нейлона, бумаги или пластика с матовой поверхностью, которую окружают полоской смоченной водой ваты или фильтровальной бумаги. В центре площадки приклеивают маленький пучок ваты либо ставят «домик» из полоски желатина — убежище для клещей. Противни с клещами помещают в изолированные боксы с определенной влажностью воздуха.

Специальный садок для выкармливания фитосейулюса в зимний период диапаузирующими самками паутинного клеща предложил Г.А. Бегляров. Садок в виде полусферического контейнера диаметром 5—10 см выполнен из органического стекла толщиной 2—3 мм (см. рис. 33, А). Для его изготовления пригодны и часовые стекла большого размера. К нижней части контейнера приклеивают стеклянную пластинку, используя следующую смесь (г): менделеевская замазка — 82 и парафина - 29. В центральной части контейнера высверливают отверстие и вставляют в него хлорвиниловую пробку, заполненную застывшим 20%-м водным раствором агара. Рядом просверливают два дополнительных отверстия диаметром 8—10 мм и закрывают их войлочными пробками. Через эти отверстия обеспечивается небольшая циркуляция воздуха и предотвращается запотевание внутренних стенок садка. Корм хищникам по мере необходимости засыпают через отверстие, которое закрывают пробкой с водно-агаровой средой.

Интересный метод лабораторного разведения предложен Л.К. Танигоши и др. (см. рис. 33, Б). Их садок представляет собой цилиндр диаметром 8,5 см и высотой 9 см, закрывающийся с обеих сторон крышками. В центре цилиндра находится сетчатая перегородка. В крышках прорезаны отверстия диаметром 2,5 см, которые заклеивают парашютным шелком. В верхнюю камеру цилиндра кладут шесть-восемь листьев фасоли с паутинным клещом и хищником. Через 3 сут цилиндр переворачивают и в верхнюю камеру (которая была нижней) помещают такое же число листьев фасоли, но только с паутинным клещом. Хищник и жертва, проявляя тенденцию к движению вверх, покидают нижнюю камеру и скапливаются на нижней стороне крышки верхней камеры. Поэтому, когда, при очередном переворачивании садка, выбрасывают листья из его нижней части, потери клещей бывают незначительны. Один такой садок позволяет получать каждые 3 сут 50-100 особей Metaseiulus occidentalis Nesbitt.

Метод «плотиков». При массовых скрещиваниях или индивидуальном воспитании большого числа особей используют метод «плотиков». Из металлической трубки диаметром 2-3 см делают острый круглый резак, с помощью которого из листовых пластинок высекают диски. В центре высечки диска пипеткой делают небольшое отверстие и вставляют в него стержень якорька, представляющего собой кусок резины с проволокой. «Плотик» свободно скользит по стержню якорька и удобен для просмотра под бинокуляром (см. рис. 32).

Разновидностью садка является углубление (микрокамера), сделанное в кусочке живой ткани корнеплодов, луковиц и клубнелуковиц, используемых для индивидуального воспитания некоторых видов клещей. Такое углубление сверху накрывают покровным стеклом, края изолируют расплавленным парафином. Кусочки ткани с микрокамерами содержат в чашках Петри при различной температуре. При ежедневных наблюдениях устанавливают продолжительность жизни отдельных фаз, плодовитость и другие биологические особенности.

Клещей тарзонемид размножают на плесневых грибах, высеянных на агаровую среду в чашки Петри при температуре 21...25 °С. Для индивидуального воспитания клещей в агаре, налитом в чашки Петри, стеклянной трубкой диаметром 1 см проделывают отверстия, представляющие собой садки для наблюдения за развитием отдельных особей.

Определение пищевой специализации. Для этой цели используют саженцы и всходы растений в вазонах, края которых обмазывают вазелином. Опытные растения (реципиенты) заселяют 30—50 особями. Каждый вариант имеет несколько повторностей. Клещей содержат свободно или в микросадках, укрепляемых на листьях. Приживаемость контролируют один раз в 5 сут, для чего осматривают листья и микросадки. При гибели клещей повторно подсаживают такое же число особей. Опыт без положительного результата считается завершенным после третьей операции с подсадкой клещей, в случае приживаемости их — после появления взрослых особей и откладки ими жизнеспособных яиц следующего поколения.