Электромонтаж Ремонт и отделка Укладка напольных покрытий, теплые полы Тепловодоснабжение

Фаунистические исследования клещей

23.10.2018

Методы изучения клещей весьма разнообразны и зависят от поставленной задачи, биологических особенностей вида, а также от технических возможностей, которыми располагает исследователь. В настоящей работе дано описание ряда методов, большинство из которых было успешно использовано нами при изучении тетранихоидных, эриофиоидных, тарзонемидных и других акариформных, а также паразитиформных клещей.

Сбор клещей. Собирают клещей в любое время года. Зимой их можно обнаружить под отслаивающимися участками коры ветвей и стволов, в древесной трухе дупел, хранилищах семян, овощей и пищевых продуктов; весной и летом — у основания распускающихся почек, в развилках ветвей, на листьях деревьев, кустарников, травянистой растительности, в лесной подстилке и почве.

При сильном заселении тетраниховых клещей собирают вместе с листьями в бумажные пакеты или полиэтиленовые мешочки; эриофиид — вместе с галлами или кусочками растительной ткани в пробирки диаметром 2,5 см и высотой 10—12 см. Сюда же вкладывают этикетки с указанием даты и места сбора, прижизненной окраски, вида кормового растения, характера вызываемого повреждения, фамилии сборщика и др. Если по прибытии в лабораторию нет возможности сразу приступить к осмотру листьев и сбору клещей, то емкости с живыми объектами, не раскрывая, помещают в холодильник, где при температуре 4...6 °C их можно хранить до 10 сут (листья дольше сохраняются, если не отделены от побегов).

При малом количестве клещей собирают с растения увлажненной кисточкой или тонкой препаровальной иглой, тщательно осматривая листья с помощью лупы 10-кратного увеличения или стереоскопического микроскопа. Паутинных клещей хорошо собирать отряхиванием. Для этого под ветку подставляют картонный или деревянный шит с наклеенным листом белой бумаги. Затем резко ударяют по ветке деревянной колотушкой или палкой с надетым на нее куском резинового шланга. Для сбора видов рода Penthaleus, Petrobia и др., которые при малейшем сотрясении растении опадают на землю, можно использовать волокуши или эксгаустер.

Из зерна и семян клещей выбирают просеиванием через сито с ячейками диаметром 0,5—1 мм. Просеивают их на черную бумагу. Клещей, повреждающих луковицы, клубни и сухофрукты, собирают при непосредственном просмотре заселенных ими органов растений с помощью стереоскопического микроскопа или лупы.

Для сбора акароидных клещей используют пищевые приманки (зерно, крупу, сухофрукты, хлеб и т. д.), которые заворачивают в марлю, увлажняют и помещают в металлическую коробку с продырявленными стенками. В приманки для усиления запаха можно добавить разлагающийся сыр, пивные дрожжи, прокисшее варенье и т. д. Клещи, находящиеся в природе, заползают в коробку и, достигнув пищевого субстрата (приманки), начинают размножаться. Через 15—20 сут приманки переносят в лабораторию и просматривают под бинокуляром или помещают в фотоэклектор.

Фотоэклектор очень удобен для выборки клещей, обитающих в лесной подстилке, почве, органических остатках, во мху, на лишайниках, в сенной трухе, а также для сбора хищных клещей с листьев деревьев, кустарников и травянистой растительности. Этот аппарат (рис. 31) представляет собой металлическую воронку высотой 45 см (диаметр большого отверстия 30 см, малого — 1,5—2 см), в которую вкладывают сито с металлической сеткой (диаметр ячеи 1,5—3 мм) или крупноячеистым мельничным газом. Изучаемый субстрат насыпают ровным слоем (5—7 см) на сито и вкладывают в воронку. Далее фотоэклектор ставят под прямые солнечные лучи или электрическую лампочку мощностью 25—40 Вт так, чтобы последняя находилась на расстоянии 5—10 см от поверхности субстрата. По мере подсыхания последнего клещи перемещаются ко дну воронки и падают через ее узкое отверстие в подставленную пробирку или баночку с водой либо консервирующей жидкостью.

Хранение. Если нет возможности готовить препараты из живых клещей, то собранные экземпляры хранят в следующем составе: 96 %-й спирт — 77 частей (или 70 %-й спирт — 87 частей), вода — 10, очищенный глицерин — 5 и ледяная уксусная кислота — 8 частей.

Уксусная кислота способствует распрямлению конечностей, а глицерин несколько размягчает и просветляет материал. Для длительного хранения уксусную кислоту не добавляют, в этом случае в качестве консерванта используют 65—75%-й спирт. Однако клещи, хранившиеся в спирте, плохо просветляются в молочной кислоте. В полевых условиях можно применять глицерин, разбавленный водой (1:1), с добавлением нескольких капель уксусной кислоты для предупреждения развития плесени. Иногда с подобной целью используют сильно разведенную молочную кислоту, но при длительном хранении клещей данный консервант непригоден, так как вызывает мацерацию тканей.

Эриофиид (иногда вместе с кусочками растительной ткани) консервируют в сиропообразном растворе сорбитола или 25%-м изопропиловом спирте, в который для предохранения от плесневения добавляют несколько кристалликов йода. При необходимости жидкость сливают на часовое стекло и в проходящем свете извлекают из нее клещей.

Галловые клещи не покидают укрытий и сохраняются в них в мумифицированном виде. Для извлечения этих животных из галлов и сухих частей растения маленькие кусочки деформированной ткани вместе с клещами помещают в углубление толстого предметного стекла, заливают консервирующей жидкостью и просветляют над огнем спиртовки или на водяной бане. Сухих клещей, собранных с гербарных образцов или из галлов, также можно восстановить и просветлить вывариванием в водном растворе хлоралгидрата.

Хранить клещей лучше в небольших пробирках диаметром 0,5 см и высотой 3 см. Каждую пробирку со сбором закрывают ватным тампоном, снабжают этикеткой и помещают в невысокие широкогорлые банки с консервирующей жидкостью.

Изготовление препаратов. Для определения вида клещей и изучения их морфологических особенностей необходимы препараты с тонкими (не толще 17 мкм) покровными стеклами, допускающими использование иммерсионной системы микроскопа.

Наиболее удачные препараты получаются из живых клещей. В каждый препарат кладут десять и более особей одного вида с таким расчетом, чтобы одна часть их лежала вверх спиной, а другая — вниз спиной или боком. Последнее особенно важно при рассмотрении копулятивного органа самца. При приготовлении препаратов используют оптические среды, в состав которых входят хлоралгидрат, гуммиарабик, сорбитол, фенол, резорцин, формалин, глицерин, йод.

Хлоралгидрат. Бесцветные кристаллы, растворимые в воде, спирте, эфире. Гигроскопичен, поэтому хранят его в герметически закрытых сосудах. При подогреве это вещество хорошо просветляет, размягчает и расправляет экзокутикулу нежных членистоногих. Хитин, вначале весьма стойкий к воздействию хлоралгидрата, при длительном соприкосновении с ним постепенно растворяется. В готовых препаратах нередко рекристаллизуется, приводя последние в негодность.

Гуммиарабик. Это камедь, выделяемая различными видами тропических акаций — вязкая жидкость, затвердевающая на воздухе. Гуммиарабик растворим в воде, совместим со многими водорастворимыми соединениями. Спирт переводит его из водного раствора в осадок, концентрированный формалин вызывает помутнение. Основная ценность гуммиарабика заключается в том, что его вязкость повышается по мере испарения воды из раствора: это имеет решающее значение, так как монтировочную жидкость используют для приготовления препаратов.

Сорбитол. Бесцветное кристаллическое вещество со сладковатым вкусом. Растворяется в воде и спирте, не растворим в эфире. Хорошо смешивается с гуммиарабиком и вместе с глицерином предотвращает рекристаллизацию хлоралгидрата в препаратах.

Фенол (карболовая кислота). Гигроскопичен. С небольшим количеством воды образует прозрачный раствор, при избытке воды мутнеет. Фенол вместе с хлоралгидратом способствует удалению мягких тканей, обесцвечиванию и расправлению хитина.

Резорцин. Бесцветные кристаллы, сладковатого вкуса, растворимы в воде, спирте, эфире. Хорошо обесцвечивает хитин и растворяет мягкие ткани, даже если раствор в течение нескольких недель хранился в открытом, доступном для воздуха сосуде. Резорцин, хранившийся несколько лет, эффективнее свежего. В присутствии формалина он образует полимер винно-красного цвета, в сочетании с соляной кислотой раствор приобретает черную непрозрачную окраску.

Формалин. Водный (40%-й) раствор формальдегида, хорошо сохраняется. Уплотняет хитин и предотвращает его растворение под воздействием хлоралгидрата. В среду, предназначенную для приготовления препаратов, добавляют 4—5%-й формалин, который получают разбавлением 40%-го заводского концентрата.

Глицерин. При комнатной температуре вязкая, густая жидкость. Размягчает ткани мелких членистоногих и предотвращает их чрезмерное уплотнение.

Йод. Плохо растворим в воде (0,33 г/л при 25 °С), хорошо — в органических растворителях и в присутствии йодидов. Для ускорения растворения йода в среду, используемую для приготовления препаратов, добавляют небольшое количество йодистого калия. Йод легко испаряется, и поэтому его следует хранить в плотно закрывающихся баночках. Применяют йод как краситель. Для получения необходимого эффекта среда, содержащая его, должна быть достаточно темной. Если в ходе препарирования клещи исчезают из поля зрения, то это свидетельствует о недостаточной концентрации йода. В этом случае в среду следует добавить несколько его кристалликов и продолжать нагревание до просветления и окрашивания клещей. Чрезмерное окрашивание клещей йодом приводит к рефлексии и нарушает фазовое освещение.

Следует отметить, что гуммиарабик, как и крахмал, способен извлекать йод из тела клещей и, таким образом, обесцвечивать их. Этот процесс в какой-то степени сдерживают сорбитол и формалин.

При изготовлении препаратов, рассчитанных на длительное хранение, в качестве фиксирующей и просветляющей среды для слабоокрашенных видов используют гуммиарабиковую смесь Фора, для сильнопигментированных клещей применяют ее модификации — жидкость Гойера Берлезе или Зингера Кифера (табл. 1).

Для изготовления смеси гуммиарабик насыпают в плотно закрывающуюся стеклянную посуду, заливают водой и оставляют на 2—3 сут до полного растворения (лучше в термостате при температуре 40...50 °С). После в банку добавляют хлоралгидрат и глицерин и дают смеси отстояться в течение 1 сут. Затем ее фильтруют через стеклянную вату или тонкий слой гигроскопической ваты. Готовый состав следует хранить в темноте или в темной стеклянной посуде с плотно закрывающейся корковой пробкой. При необходимости смесь можно разбавлять дистиллированной водой до нужной концентрации.

При детальном исследовании тонких морфологических структур (строение эмподия, щетинок и др.), особенно темноокрашенных видов, часто недостаточно просветления, достигаемого в гуммиарабиковой жидкости. В этом случае требуется предварительное обесцвечивание материала. Хорошие результаты получают при использовании смеси, состоящей из абсолютного спирта и четыреххлористого углерода (1:1). Свежесобранных клещей помещают в этот состав на 1—2 сут, затем переносят в молочную кислоту и нагревают на водяной бане в течение 1—2 ч для извлечения остатков жироподобных и красящих веществ. Далее клещей промывают 50%-ным спиртом или выдерживают в течение нескольких минут в хлоралфеноле следующего состава: фенол (бесцветные кристаллы) — 112,5 г, хлоралгидрат — 125 г и дистиллированная вода — 12,55 мл.

Затем в каплю среды Фора, нанесенную на предметное стекло, помещают приготовленных клещей и осторожно накрывают покровным стеклом, не допуская появления пузырьков воздуха. Если пузырьки все же образовались, их можно удалить легким подогреванием препарата над пламенем спиртовой горелки пли на водяной бане, не доводя до кипения. Одновременно подогревание способствует распрямлению конечностей клещей и ускоряет процесс просветления.

При изготовлении препаратов эриофиид хорошие результаты получают при предварительном просветлении их в жидкости Коно, в состав которой входят: хлоралгидрат — 100 г, глицерин — 10 г, дистиллированная вода — 50 мл и соляная кислота концентрированная — 1 мл. Клещей помещают в жидкость, которую нагревают на спиртовке или водяной бане до полного просветления, после чего готовят из них препараты в жидкости Фора.

Кифер рекомендует изготовлять препараты с использованием следующих компонентов. Для состава А: сорбитол — 3 г, гуммиарабик (порошок) — 1 г, йод кристаллический — 0,02 г и 4%-й формальдегид из 40%-го концентрата — 5 мл. Полного растворения составных частей можно добиться взбалтыванием. Далее добавляют: хлоралгидрат кристаллический — 14 г, глицерин — 1 мл, калий йодистый — 0,1—0,2 г и йод кристаллический — 0,1—0,2 г. При необходимости можно добавить небольшое количество 4%-го раствора формальдегида.

Для приготовления состава Б рекомендуют следующие компоненты: сорбитол — 1 г, хлоралгидрат — 2,5 г, йод кристаллическим — следы, дистиллированная вода — 5—8 мл и соляная кислота концентрированная — 7—8 капель. Для состава В используют: фенол 1—3 капли и воду — минимальное количество, чтобы избежать помутнения.

Каждый из составов (А, Б и В) необходимо хранить отдельно в плотно закрывающихся сосудах. Для их использования необходимо иметь отдельные пипетки.

При приготовлении препарата с помощью пипетки на дно углубления в толстом предметном стекле помещают две капли состава А, затем тонкой иглой сюда переносят клещей и добавляют по одной капле составов Б и В. Смесь подогревают, не доводя до кипения, и следят с помощью бинокуляра за ходом просветления клещей, добавляя при необходимости по одной капле каждого из упомянутых составов.

Монтируют клещей в составе А. Перед тем как положить покровное стекло, под них иногда помещают тонкие хлопчатобумажные «нити», чтобы избежать возможного раздавливания. Затем, двигая покровное стекло, придают клещам нужное положение. Приготовленные препараты не рекомендуется подогревать на спиртовке.

Для каждого вида (образца) достаточно иметь пять-десять препаратов, в которых должно содержаться по пять-десять клещей. На приготовленные препараты с правой стороны предметного стекла наклеивают этикетку или делают надпись тушью. В последнем случае на стекло предварительно наносят тонкий слой канадского бальзама. Затем препараты в течение 5—10 сут подсушивают в термостате при температуре 60 °C и далее используют для микроскопирования. Если препараты предназначены для длительного хранения, то через 2—3 мес. после изготовления покровное стекло окантовывают клеем БФ-2, нитролаком или битумным лаком.

Контурные зарисовки морфологических деталей делают с помощью рисовального аппарата. Размеры дают в мирометрах, обычно средние из 10—20 промеров. Длину тела измеряют от вершины гнатосомы или переднего края проподосомы (это обязательно отмечают) до заднего края брюшка. Конечности измеряют с амбулакрально-эмподиальным аппаратом или без него, что также отмечено. Длину тазиков при измерении конечностей не учитывают. Под шириной клеща или органа понимают максимальные размеры их поперечника в препарате.

Реставрация препарата. Подлежащий реставрации препарат помещают в чашку Петри с дистиллированной водой, предварительно удалив влагонепроницаемую окантовку, и выдерживают в течение суток при комнатной температуре. В результате гуммиарабиковая смесь полностью растворяется, что позволяет удалить покровное стекло, не вынимая препарат из воды. Эту операцию необходимо выполнять осторожно, следя за тем, чтобы образцы далеко не уплыли, так как в толще воды обесцвеченных клещей трудно обнаружить. Клещей, освобожденных от покровного стекла, препаровальной иглой на несколько минут переносят в разбавленную (1:1) молочную кислоту. Дальнейшие операции по приготовлению препарата проводят одним из вышеописанных способов.
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: