Электромонтаж Ремонт и отделка Укладка напольных покрытий, теплые полы Тепловодоснабжение

Массовое производство энтомопатогенных вирусов

30.11.2018

Массовое производство вирусов, за немногими исключениями, пока не достигло промышленного размаха, да и мелкомасштабное их производство для экспериментальных целей развито еще недостаточно. Нужные количества вирусов можно получить, скармливая загрязненную вирусом листву здоровым личинкам хозяина на разных стадиях развития. Инокулят для начала производства получают от нескольких больных личинок. Обычно кормовые растения, на которых обитает большая естественная или искусственная популяция личинок насекомого, опрыскиваются водными суспензиями, выделенными из больных личинок. Через 7—9 дней, когда обработанные таким образом личинки начинают погибать, их собирают. Смирнов разработал полевую установку, вмещающую 500 000 личинок пилильщика Neodiprion swainei Meddleton и листву для их питания. В первые 5—8 дней питания листву ежедневно опрыскивали суспензией вируса. Больные и гибнущие личинки либо сами падали с листвы, либо удалялись. Затем их помещали в стеклянные сосуды с водой и растирали пестиком. Смесь (1 часть личинок и 3 части воды) отстаивалась несколько дней, а затем ее трижды фильтровали. Чтобы получить больше полиэдров, можно увеличить число фильтраций. Фильтраты хранили в темноте при 4°С и pH 6—7, чтобы не допустить растворения полиэдров. Смирнов получил этим методом из 100 000 убитых вирусом личинок пилильщика 13 л суспендированных полиэдров. Для дальнейшей очистки применяют дифференциальное центрифугирование при малых скоростях. Стэйрс описал еще один метод получения из пилильщиков сравнительно чистого вирусного материала. Метод состоит в простом удалении средней кишки из заболевших, но еще живых личинок. В этой кишке содержится весь реплицированный вирусный материал, благодаря чему легко получают незагрязненные полиэдры в высокой концентрации.

Лучший пример промышленного производства вирусов — метод, разработанный для вируса ядерного полиэдроза Heliothis. При его разработке основными целями были производительность метода, безопасность получаемого вируса и его полевая эффективность. Поскольку в настоящее время удается размножать вирусы только в живых клетках, тканях или целых организмах, выгоднее всего использовать живого хозяина. Развитию производства вирусов способствовала успешная разработка в последние 30 лет полусинтетических или искусственных рационов для насекомых. Сейчас удается круглогодично выращивать хлопковую совку Heliothis zea (Boddie) в лаборатории. В общих чертах метод состоит в том, что полусинтетическая, основанная на агаре питательная среда со всеми необходимыми веществами и витаминами разливается по сосудам, каждый из которых по объему достаточен для полного развития одной гусеницы. После застывания питательной среды только что вылупившихся из яиц гусениц помещают по одной в ячейки и инкубируют 5—7 дней при 30±1°С. Пять процентов гусениц оставляют для завершения развития, чтобы обеспечить маточный материал для дальнейшего разведения, а остальные 95% идут на производство вируса. Поверхность питательной среды опрыскивают вирусной суспензией, и через 6—8 дней благодаря репликации внутри гусениц образуется в 5—10 тыс. раз больше вируса, чем было израсходовано для инокуляции. Согласно Игноффо, одна зрелая гусеница дает 36 млрд. телец-включений. Это примерно 30% ее сухого веса. Убитых вирусом гусениц собирают, растирают, фильтруют и перерабатывают в сухой или влажный продукт, готовый к использованию после определения активности и чистоты.

Чтобы ускорить процесс и уменьшить затраты ручного труда на опытной установке, там, где это было возможно, применялась автоматизация. Игноффо сообщает, что опытная установка давала 1 млн. личинок в месяц. Соответственно увеличив масштабы технологии, испытанной на опытной установке, можно перейти к промышленному производству. Стоимость получения одной гусеницы составит при этом менее 2 центов, тогда как на лабораторной стадии и на стадии опытной установки она составляет 7 и 5 центов соответственно. Сейчас рассматриваются другие возможные промышленные методы, например применение культуры тканей и ферментации с использованием дрожжевых и бактериальных клеток в качестве хозяев.

Много времени заняла проверка безвредности вируса — главным образом потому, что ранее таких работ не проводилось и пришлось вырабатывать особые критерии безопасности. Игноффо описывает множество сложных тестов, предпринятых для проверки безопасности вируса ядерного полиэдроза Heliothis, и отмечает, что «ни в одном случае, ни в одном опыте токсичность или патогенность для другого организма, кроме вида-мишени Heliothis, не выявлялась». Ho только 8 декабря 1970 г. Управление по пищевым и лекарственным препаратам США официально дало временное разрешение на применение ВЯП Heliothis. В 1973 г. применение этого вируса как средства защиты растений было разрешено в Испании и в других странах. В январе 1976 г. Агентство по охране окружающей среды США впервые зарегистрировало «пестицид», изготовленный из встречающегося в природе вируса насекомых.
Имя:*
E-Mail:
Комментарий: